一种基于 CRISPR-Cas9 的新型方法 SEED/Harvest 整合了单链退火修复途径，可以更有效地修改果蝇的基因组，而不会造成残留损伤。该技术可以在整个基因组中进行精确而有效的DNA修饰，促进对各种组织和发育阶段的蛋白质功能的研究，可能有益于遗传学、生物技术和医学研究。

巴塞尔大学生物中心的 Markus Affolter 教授领导的团队开发出一种新方法，使 CRISPR/Cas 技术更先进，能够在基因层面更精确、无缝地标记蛋白质。这项创新具有巨大的潜力，可以增强生物体内的蛋白质研究，并扩大医学研究的机会。

革命性的 CRISPR/Cas 技术可以精确改变生物体的 DNA。利用识别特定 DNA 序列的向导RNA，Cas9 蛋白被招募到该序列并切割 DNA。这种定向切割允许在此特定位置修复或改变 DNA。

巴塞尔大学生物中心的 Markus Affolter 教授团队现已在果蝇(Drosophila melanogaster)中开发出一种名为 SEED/Harvest 的新方法。该方法将 CRISPR-Cas9 技术与单链退火 (SSA) 修复途径相结合，使全基因组改变能够更有效地进行，而不会留下不必要的疤痕。这项研究已发表在《发育细胞》杂志上。

两种方法相结合

SEED/Harvest 方法分为两个步骤。第一步，研究人员将标记基因引入蛋白质编码区内的目标 DNA 位点。该标记被放置在目标位置，用于分离成功的修饰。

在第二步中，切除标记并通过单链退火 (SSA) 修复途径修复 DNA 断点。“这使我们能够无缝切割 DNA，同时保持其全部功能，”第一作者 Gustavo Aguilar 解释道。“两种方法的结合使得标记基因组中的任何所需蛋白质成为可能，而不会造成附带损害，这使我们能够研究蛋白质在生物体中的功能。”

更精准、更高效

“由于我们希望在研究中引入并分析整个基因组中的 DNA 变化，因此该方法必须既精确又高效，”Affolter 解释道。“而 SEED/Harvest 方法兼具了这两点。它结合了对成功插入的最可靠筛选和无缝标记的所有优势。”