与人类不同，海龟和其他爬行动物(例如鳄鱼)没有性染色体。它们的性别是在孵化环境下发育过程中定义的。在海龟中，性别取决于巢的温度：温度升高会产生雌性，温度降低会产生雄性。识别孵化海龟的性别特别具有挑战性，因为它们没有外部性器官和异形性染色体-没有X或Y。迄今为止，在海龟孵化中可靠地识别性别的方法数量有限。随着全球气温的迅速升高，迫切需要明确评估这些濒危动物的性别比。

佛罗里达大西洋大学的查尔斯·施密特科学学院的研究人员开发了一种首创的技术，该技术具有微创性，并极大地提高了在全球各地筑巢点的种群水平上测量新生海龟性别比的能力。他们使用这种技术来识别两种乌龟种类的新生儿中的性别：淡水乌龟(Trachemys scripta)和海龟(Caretta caretta)均使用少量血液样本进行分析。这是首次通过温度依赖性性别测定法在孵化的雏鸡血样中发现性别特异性蛋白质表达模式的差异。这项研究是评估气候变化对濒危龟种影响的关键步骤。

对于这项发表在《科学报告》上的研究，研究人员使用了一种免疫测定方法来测试样品中是否存在几种已知在性别分化中起重要作用的蛋白质。研究结果表明，可以从新生雄性海龟的血液样本中可靠地检测出抗苗勒激素(AMH)，而雌性则不能，并且可以用作性别特异性标记。

研究人员使用组织学或腹腔镜检查法验证了海龟的性别，结果表明，他们开发的新方法可在1-2天大的幼体中鉴定淡水龟和logger海龟的性别，并且这种方法可达到90%在83到177天(120至160克)的鱼中，能够可靠地识别性别。

“目前，通过温度依赖性性别鉴定来鉴定新生乌龟性别的方法所固有的挑战是促使我们寻求替代方法的原因，” Jeanette Wyneken博士说，是FAU的Charles E. Schmidt理学院的生物科学教授。“我们的研究结果为爬行动物保护领域，特别是乌龟的保护和管理提供了一种有价值的新工具，可用于准确评估幼体的性别比。”

与目前具有温度依赖性性别分化的海龟进行性别鉴定的分子方法相比，FAU研究人员通过蛋白质印迹分析使用血液样本开发的方法具有快速，微创(需要非常少量血液)和孵化方法的优点。然后可以立即释放海龟。

这项研究的高级作者鲍里斯·特扎克(Boris Tezak)博士说：“我们研究的信息应能使其他科学家和管理人员精确监控由于温度随时间变化而可能引起的性别比变化。”他的博士学位目前在FAU学习，现在是杜克大学医学中心的博士后研究员。“这还将帮助他们估计气候变化将如何影响后代的孵化，并允许迅速评估用于控制温度的性别决定所用于帮助恢复海龟和其他爬行动物的管理策略。”

出于多种原因，要确定巢穴中自然龟孵化的性别比具有挑战性，其范围从伦理学的形态学限制到对实际指导胚胎性别分化的机制缺乏了解。通常，海龟的特征是寿命长和晚熟，因此它们在达到性成熟之前不会发生两性分化-海龟物种通常需要超过25年的时间才能达到性成熟。

Itzel Sifuentes-Romero博士说：“由于难以轻易识别出孵化性，因此大多数大型研究龟孵化性比例的研究都依靠代理间接推断性别比，例如巢温度，气温或孵化持续时间。”博士，合著者，FAU查尔斯·施密特科学学院生物科学博士后，FAU脑研究所(I-Brain)博士后。“但是，这些替代方法通常无法匹配天然海龟巢或鸟群的主要性别比。我们相信，我们开发的新技术将能够在全球人